一、wyatt多角度激光光散射儀測試前準備
 

　　溶劑準備
 

　　水相體系：使用超純水或配制鹽溶液(約1L)，加入0.02% NaN?抑菌劑，用0.22μm濾膜過濾。
 

　　有機相體系：采用HPLC級溶劑，同樣用0.22μm濾膜過濾(進口試劑根據實際情況處理)。
 

　　樣品準備
 

　　根據分子量范圍配制濃度(定量環100μL)：
 

　　分子量~1000kDa：0.5-1mg/mL
 

　　分子量~100kDa：1-2mg/mL
 

　　分子量~10kDa：3-5mg/mL
 

　　分子量~5kDa：5-10mg/mL
 

　　樣品需用0.22μm或0.45μm濾膜過濾，或通過離心處理去除雜質，盡可能使用流動相配制。
 

　　儀器檢查
 

　　確認電源線連接、電源開關及交換機(適用于網線信號連接)已開啟。
 

　　二、儀器開機與平衡
 

　　開機順序
 

　　依次打開泵、柱溫箱(設定溫度)、進樣系統(手動/自動進樣器)、示差或紫外檢測器、粘度檢測器、多角度激光光散射檢測器電源及計算機。
 

　　系統沖洗與平衡
 

　　開啟泵，用超純水沖洗系統約5分鐘(purge泵)，關閉purge閥。
 

　　使用最新配制的流動相沖洗系統(有機體系直接使用流動相)。
 

　　調節流速至0.1mL/min(若接入粘度檢測器，需待其進入工作界面后再開啟泵，且IP & DP處于purge on狀態)。
 

　　若系統中未接入GPC/SEC柱，可直接將流速調至0.1-1.0mL/min(無粘度檢測器時，示差檢測器purge閥需處于“Purge On”狀態)。
 

　　若系統中已接入GPC/SEC柱，需以0.1mL/min為起始流速，每1-2分鐘提高0.1mL，將流速調整至0.4-0.5mL/min，充分平衡系統。
 

　　平衡時間：水相體系建議提前一天沖洗和平衡，第二天開始試驗；有機相體系平衡時間一般為3-12小時。
 

　　三、測試操作與數據采集
 

　　系統平衡與基線穩定
 

　　待系統充分平衡后，逐步調整流速至試驗流速。
 

　　調節示差檢測器的Purge閥至“Purge Off”狀態，待信號穩定后歸零(Zero)。
 

　　粘度計(Visco Star)操作方法見附件，待基線穩定。
 

　　調用試驗模板
 

　　在Astra軟件中調用相應的試驗模板(推薦使用安裝工程師創建的Template/Method)。
 

　　單針進樣：File → New → Experiment from Template/Method → My Templates/methods，選擇相應試驗模板。
 

　　自動進樣器進樣：File → New → sample set Template/blank sequence → My Templates/method，選擇相應試驗模板。
 

　　進樣與數據采集
 

　　將進樣閥由“load”轉至“inject”狀態，通過進樣系統進樣。
 

　　Astra軟件自動開始采集數據，數據采集完成后，軟件根據設定時間停止，或手動停止(Experiment → Stop)。
 

　　數據保存
 

　　數據采集完成后，依次點擊File → Save as...，命名文件并保存。
 

　　四、wyatt多角度激光光散射儀數據處理與報告查看

 

　　數據處理流程
 

　　基線調整：雙擊Baseline，勾選LS 11(90°角)，調整基線端點，保證基線水平，點擊OK/Apply保存。
 

　　定峰：移動鼠標至峰的起始點，按住左鍵拖至峰的落點，松開左鍵定義峰區域，微調峰區域邊緣，點擊OK/Apply保存。
 

　　dn/dc值輸入與歸一化：輸入dn/dc值并選擇normalise(若模板中已使用<50kDa標準樣品如BSA、dextran在該體系下歸一化，則無需重復操作)。
 

　　查看報告：完成上述步驟后，查看報告獲取測試結果。
 

　　儀器校正(定期進行)
 

　　延遲體積校正：校正各檢測器間管路體積，確保峰尖位置對齊，通常由安裝工程師完成，結果保存于Astra軟件模板中。
 

　　90°角信號校正(甲苯校正)：獲取90°角散射光強度值與電壓值的校正系數，推薦每年或每半年一次。
 

　　十八角度歸一化校正：以90°角為基準，校準其他17個檢測器，使用Rg<10nm的標準品(如30kDa的右旋糖酐Dextran或牛血清白蛋白BSA)進行校正。